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镉胁迫对甘薯苗生理生化指标的影响

胡玉龙,李雪华,赵苹艺,丁楚楚,徐甜甜,孙存华

(江苏师范大学生命科学学院,江苏 徐州 221100)

摘要:采用水培法,以甘薯(Ipomoea batatas Lam.)宁紫薯一号为材料,研究重金属镉(Cd2+)对其叶绿素含量、脂膜过氧化程度、活性氧含量以及抗氧化酶活性的影响。结果表明,镉胁迫下甘薯叶片总叶绿素含量减少;膜脂过氧化产物丙二醛含量升高;超氧阴离子产生速率增加,过氧化氢含量升高;SOD、CAT活性先上升后下降,POD活性在处理期间一直处于上升趋势。镉胁迫导致甘薯叶片光合作用减弱,衰老加速。同时甘薯植株也会对镉胁迫作出相应反应,保护酶活性上升降低了镉引起的细胞氧化损坏,维护了细胞的正常新陈代谢。

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关键词 :镉胁迫;甘薯(Ipomoea batatas Lam.);脂膜过氧化;抗氧化酶

中图分类号: S531;Q945.78 文献标识码:A 文章编号:0439-8114(2015)04-0858-04

DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.04.021

收稿日期:2014-06-30

作者简介:胡玉龙(1988-),女,湖北荆州人,在读硕士研究生,研究方向为生物遗传与环境,(电话)15190668525(电子信箱)846210538@qq.com。

由于自然因素和人类活动的影响,以及酸雨作用使得土壤中Cd2+的可溶性增加,导致土壤毒性增强,区域性土壤Cd2+污染严重,如农田与森林生态系统。农田Cd2+污染直接导致农作物减产和高Cd2+的积累[1]。Cd2+通过根的吸收进入植物体,并在植物体内转移储存。Cd2+通过与酶的活性中心结合以及干扰植物体内的元素平衡等方式影响植物体的正常生理活动。镉元素对人体而言是一种有毒的重金属元素,可通过食物链进入人体,长期食用含镉的食物容易造成镉在人体肾脏、肝、骨质等组织内的积累,损坏人体相关组织功能,危害身体健康。镉元素在人体内的积累可引发水蛋白症、肾结石等一系列的肾损伤临床表现。早期研究表明,镉元素具有致癌作用。镉对蛋白质的毒性作用,包含对抗氧化酶的破坏,影响了机体对自由基的清除,从而导致细胞膜以及与癌变过程有关的DNA的损伤[2]。

甘薯(Ipomoea batatas Lam.)又称地瓜、白薯、红薯、番薯等,为旋花科一年生植物,属世界性块根粮食。中国是世界上最大的甘薯生产国,甘薯种植面积和总产量约为世界总种植面积和总产量的70%~85%,且甘薯品种资源丰富,中国保存的甘薯种质资源约有2 000份[3]。甘薯适应能力强,生物产量和经济产量高,既可以作为粮食作物和饲料作物,也可以作为能源作物,通过加工形成乙醇。甘薯不仅营养价值丰富,而且具有抗癌、食疗以及工业价值。甘薯对土壤中的镉有一定的吸收积累能力,在轻度镉污染(0.57 mg/kg)条件下,湘薯15、泉薯9号等甘薯茎叶镉含量超过了无公害质量标准[4],绵粉1号与绵薯8号、绵薯4号薯块存在镉超标,特别是绵薯5号镉含量为110 μg/kg,为土壤含镉量的17.9%[5],说明轻度镉污染土壤种植的甘薯存在一定的摄食健康风险,同时也给甘薯生长发育带来胁迫伤害。本研究探讨甘薯对镉胁迫的生理和分子响应机制以及如何提高甘薯对镉胁迫的耐受性,旨在揭示重金属镉对甘薯叶片生理生化方面的影响,以及甘薯在镉胁迫下自我调节保护的机制。

1 材料与方法

1.1 供试材料

以甘薯宁紫薯1号为供试材料。2013年4月将薯块种入苗床,约2周后,苗床上长出甘薯幼苗。在苗床上培养幼苗1周后,将幼苗移栽于盆中培养。待幼苗枝叶旺盛,采其茎(含叶片)作为试验材料。

1.2 方法

将长势相似的幼苗用去离子水洗净后用霍格兰营养液培养。1周后,茎生根,分两组分别用标准霍格兰营养液和含100 μmol/L的CdCl2的霍格兰营养液处理幼苗(每隔2 d换一次营养液),置于25 ℃/20 ℃(白天/夜晚)培养箱中、每天12 h光照条件下培养,记录8 d内不同处理幼苗的生长情况。每隔1 d上午9:00定时采样,选取植株倒数第3片至第10片叶进行生理指标的测定,每个指标重复测定3次。

采用紫外吸收法测定叶绿素含量[6];采用硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量[7];采用TiCl2显色法测定过氧化氢含量[7];采用羟胺反应法测定超氧阴离子含量[8];采用紫外吸收法测定过氧化氢酶活性[8];采用氮蓝四唑法测定超氧化物歧化酶活性[8];采用愈创木酚法测定过氧化物酶活性[8]。以上试验均重复取材测定3次,取平均值。

1.2 数据统计分析

采用Excel 2013软件进行数据计算,Origin7.5软件进行绘图分析,SPSS16.0软件进行方差分析。

2 结果与分析

2.1 镉离子对甘薯叶片叶绿素含量的影响

由图1可知,对照组甘薯叶片在8 d内叶绿素含量平缓上升,而镉胁迫下,甘薯总叶绿素含量逐渐下降,处理第2天至第4天下降幅度达到整个处理阶段的最大程度。处理第2天,甘薯叶片叶绿素含量略小于对照组,但不显著;在第4天处理组叶绿素含量显著(P<0.05)低于对照,对照叶片叶绿素平均含量为2.360 mg/(g·FW),镉处理组叶绿素含量为1.728 mg/(g·FW)。第6天对照组叶片叶绿素含量达到镉处理组的1.6倍,第8天达到镉处理组近2倍,且差异达到显著水平(P<0.05)。

2.2 镉离子对甘薯叶片MDA含量的影响

植物细胞膜在逆境条件下,会发生脂膜过氧化,MDA是脂膜降解的最主要产物之一。通常将其作为脂膜过氧化程度的一个指标,用于表示细胞膜受损害的程度和植物对逆境抵抗力的强弱。由图2可知,在8 d内对照叶片MDA的含量保持稳定状态,而镉处理甘薯叶片脂膜氧化程度急剧加大。在处理第2天达到显著水平(P<0.05),是对照MDA含量的1.3倍;在镉离子胁迫第8天,丙二醛含量与对照相比,达到极显著水平(P<0.01)。

2.3 镉离子对甘薯叶片活性氧含量的影响

活性氧类(Reactive oxygen species)是生物有氧代谢过程中的副产物,包括超氧阴离子自由基、过氧化氢和羟基自由基等。活性氧由于存在未配对自由电子,化学性质十分活跃。过高的活性氧水平引起细胞和基因结构的损坏。活性氧的爆发是植物衰老的特征之一。植物在逆境中,活性氧将逐渐积累,破坏植物器官,加速植物的衰老。

2.3.1 镉胁迫下过氧化氢含量的变化 过氧化氢是氧代谢反应中间产物之一。由图3可见,镉离子胁迫下,甘薯叶片过氧化氢逐渐累积,与正常培养条件下的甘薯叶片相比,第4天累积量是对照组含量的1.7倍,差异达到显著水平(P<0.05),第8天处理组含量达到125.63 nmol/(g·FW),是对照组的3.2倍,差异达到极显著水平(P<0.01)。随着胁迫天数的增加,过氧化氢产生的速率不断增加,叶片衰老程度也随之加深。

2.3.2 镉胁迫下超氧阴离子自由基含量的变化 超氧阴离子自由基是生物体内的活性氧之一,超氧阴离子自由基可以转化成攻击性更强的羟基自由基,进而引发脂膜的氧化和脱脂化,直接攻击核酸、蛋白质等,从而导致核酸结构的损坏、蛋白质聚合、多肽链断裂、酶蛋白失活等。如图4所示,在镉离子胁迫下,超氧阴离子自由基产生速率逐渐升高,在第6天超氧阴离子自由基产生速率为对照组的1.6倍,差异达到显著水平(P<0.05);胁迫第8天其产生速率约为对照的1.7倍,差异达到极显著水平(P<0.01)。

2.4 镉离子对甘薯叶片保护酶活性的影响

2.4.1 镉胁迫下CAT活性的变化 镉离子处理甘薯叶片后,其CAT活性呈现先上升后下降的趋势。在第4天过氧化氢酶活性极速上升,对照组叶片过氧化氢酶活性为370.9 U/(g·FW),镉胁迫叶片过氧化氢酶活达到674.5 U/(g·FW) ,是对照组的1.8倍;第6天达到最大值,第8天处理组CAT 酶活急剧下降为587.1 U/(g·FW)。

2.4.2 镉胁迫下SOD活性的变化 超氧化物歧化酶(SOD)是脂膜过氧化防御系统的主要保护酶,其催化活性氧发生歧化反应产生过氧化氢和单线态氧,从而避免植物遭受严重损害。较高的超氧化物歧化酶活性是植物抵抗逆境胁迫的生理基础。在镉离子胁迫下,甘薯叶片SOD活性表现为先上升后下降的趋势。在镉胁迫前6天,SOD活性逐渐上升,第4天其含量为对照的1.4倍,差异达到显著水平(P<0.05);在第6天SOD活性达到最大值,为对照组的2.6倍,差异达到极显著水平(P<0.01);而后镉胁迫下甘薯叶片SOD活性呈现下降趋势。

2.4.3 镉胁迫下POD活性的变化 正常处理的甘薯叶片在8 d内其POD活性维持在一个相对稳定的区间,镉离子胁迫下的甘薯叶片POD活性呈现上升趋势;在0~4 d内平缓上升,第6天上升幅度达到最大,POD活性是正常处理的2.3倍,差异达极显著水平(P<0.01),胁迫第8天达最大值。

4 小结与讨论

通过本试验可知,镉胁迫造成甘薯叶片叶绿素含量下降,活性氧含量逐渐上升,直接或间接导致细胞膜脂过氧化,在短时间内保护酶活性增加。在长期的进化过程中,甘薯形成了一套自我保护机制,保护酶如SOD、CAT等活性的提升在一定程度上缓解了植物细胞氧化程度,减轻了细胞受到的伤害,增强了植物对镉的耐受性。同时,本研究结果表明,镉胁迫条件下过氧化物酶对甘薯有着更长久的保护作用,且镉胁迫对甘薯幼苗的伤害和活性氧爆发的程度与胁迫时间呈正相关性。

叶绿素是光合作用的物质基础,其含量高低直接影响光合作用的强弱及物质合成速率。植物对镉元素的积累将影响植物体内叶绿素的含量,降低光合作用速率。本研究中,镉胁迫条件下甘薯宁紫一号叶片于第2天有变黄迹象,至第4天,叶片明显变黄、萎蔫,总叶绿素含量呈现逐渐下降的趋势,而对照中叶绿素含量呈上升趋势。这与以往研究结果类似,如镉胁迫条件下绿豆芽的叶片随胁迫时间的延长叶片明显变黄[9];菹草葵在镉胁迫4 d后,叶片也出现明显枯黄现象,并且植株生长出现明显病态症状[10]。这种现象出现的原因可能是镉离子影响了叶绿素合成所需要的酶的结构。重金属镉对植物光合系统的毒害是对光合作用过程及植物体内相关生理活动的整体伤害[11],包括对叶绿素结构的破坏,光能的吸收、转变过程的破坏及构成光合系统所需物质的合成过程的破坏等。

镉胁迫条件下,植株体内将产生大量的活性氧,这些活性氧将与脂膜的不饱和脂肪酸发生脂膜过氧化反应,产生大量的MDA。本研究中,镉胁迫条件下甘薯叶片MDA逐渐累积,超氧阴离子自由基产生速率不断升高,过氧化氢含量上升。以往研究中,镉处理玉米植株也有类似现象,玉米叶片超氧阴离子自由基产生速率迅速升高,H2O2随镉浓度和处理时间的增加而大量积累[12]。活性氧的爆发在某种程度上表明了环境对植物带来的伤害程度,镉对甘薯幼苗的损害程度随着胁迫时间的延长愈发严重,最终导致细胞膜系统结构的稳定性和功能的完整性被破坏。

植物自身拥有相应的防御抵抗系统应对重金属镉胁迫。其中重金属的区隔化和保护酶体系是较为重要的防御体系。在细胞壁的沉淀以及细胞内的区隔化分布(如液泡作为规避镉的场所可限制金属在植物体内的移动),降低镉对植物的毒性[13,14] 。植物保护酶体系将对镉迁移给植物带来的伤害进行防御抵抗,本试验主要探讨保护酶对甘薯的保护机制。镉胁迫导致甘薯叶片抗氧化酶(POD、SOD和CAT)活性增加,而抗氧化酶活性的增加与植物对逆境胁迫的耐性有着直接的关系[15]。有研究表明轻度镉胁迫有利于提高水稻的SOD活性,而高浓度镉胁迫对水稻的SOD活性有抑制作用[16]。本试验中,镉胁迫条件下甘薯叶片POD与SOD、CAT相比维持较高的酶活状态最长,而POD在8 d内酶活一直处于上升阶段,说明在镉胁迫后期,POD发挥着对植物更好的保护作用。这与干旱胁迫下大豆的保护酶特征类似[17],而3者中CAT对镉胁迫的敏感度更高。

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参考文献:

[1] 黄益宗,朱永官.森林生态系统镉污染研究进展[J].生态学报,2004,24(1):101-108.

[2] ELINDER C G,LARS J. 镉暴露和健康危害——最近的发现[J].AMBIO-人类环境杂志,1996,25(5):369-372.

[3] 李春红,魏益民.甘薯食品加工及研究现状[J].中国食品与营养,2004(5):31-33.

[4] 刘昭兵,纪雄辉,田发祥,等.不同基因型甘薯(Ipomoea batatas Lam.)吸收累积Cd的特征性差异性研究[J].农业环境科学学报,2010,29(9):1653-1658.

[5] 何志坚,李大春,余金龙,等.甘薯重金属及农药残留的测定与食用安全分析[J].江苏农业科学,2012,40(6):275-277.

[6] 苏正淑,张宪政.几种测定植物叶绿素含量的方法比较[J].植物生理学通讯,1989(5):77-78.

[7] 刘家尧,刘 新.植物生理学实验教程(第二版)[M].北京:高等教育出版社,2010.

[8] 李 玲,李娘辉,蒋素梅,等.植物生理学模块实验指导[M].北京:科学出版社,2010.

[9] 张 琼,陈晓燕,陈 梅,等.镉对绿豆幼苗生长影响的研究[J].漳州师范学院学报(自然科学版),2006,54(4):106-111.

[10] 谷 巍,施国新,张超英,等.Hg2+、Cd2+和Cu2+对菹草光合系统及保护酶系统的毒害作用[J].植物生理与分子学学报,2002,28(1):69-74.

[11] 章秀福,王丹英,储开富,等.镉胁迫下水稻SOD活性和MDA含量的变化及其基因型差异[J].中国水稻科学,2006,20(2):194-198.

[12] 王 芳,常盼盼,陈永平,等.外源NO对镉胁迫下玉米幼苗生长和生理特性的影响[J].草业学报,2013,22(2):178-186.

[13] 周 健.硫和硒对镉胁迫下水稻幼苗生理生化特性及镉的吸收分配影响研究[D].上海:华东理工大学,2013.

[14] 周守标,徐礼生,吴龙华,等.镉和锌在皖景天细胞内的分布及化学形态[J].应用生态学报,2008,19(11):61-71.

[15] 王 霞,吴 霞,孙 璇,等.镉离子对植物胁迫效应的研究进展[J].运城学院学报,2013,31(2):67-69.

[16] LIU J G,ZHANG H M,ZHANG Y X,et al.Silicon attenuates cadmium toxicity in Solanum nigrum L. by reducing cadmium uptake and oxidative stress[J].Plant Physiology and Biochemistry,2013,68:1-7

[17] 莫 红,翟兴礼.干旱胁迫对大豆苗期生理生化特性的影响[J].湖北农业科学,2007,46(1):45-48.

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