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蒜瓣浸液抗柔嫩艾美耳球虫效果研究

刘立恒,罗 锋,吴家斌

(江西农业大学动物科学技术学院,南昌 330045)

摘要:为了考察大蒜浸出液在抗鸡球虫临床上的应用。试验设Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,第Ⅰ组:卵囊分别投入50%、20%、10%的蒜瓣浸出液、2.5%重铬酸钾液中,恒温培养24、48、72 h后计算卵囊孢子化率。第Ⅱ、Ⅲ组:分别以50%蒜瓣浸出液抑杀的未孢子化、孢子化卵囊,恒温培养48 h洗净感染1×105个/只卵囊;第Ⅳ组:感染1×105个/只孢子化卵囊,以20% 的蒜瓣浸出液作为驱虫中药替代饮水;第Ⅴ组:感染1×105个/只孢子化卵囊后不给药;第Ⅵ组:不感染不给药。结果表明,50%、20%浓度蒜瓣浸出液于24、48、72 h后卵囊孢子化率与对照组差异均显著(P<0.05);以第Ⅱ组雏鸡的平均增重及相对增重率最高,组间差异不显著,与感染对照组(Ⅴ)差异显著;第Ⅲ组平均OPG数仅次于感染对照组(Ⅴ),远高于Ⅱ、Ⅳ组差异显著;第Ⅱ、Ⅳ组卵囊比值在25%~50%区间,卵囊值均为10;第Ⅲ组卵囊比值在75%~100%区间,卵囊值为40;第Ⅲ、Ⅴ组部分鸡只出现血便;第Ⅲ组病变值(11.7)仅次于第Ⅴ组(23.3),第Ⅲ、Ⅳ组间差异显著;在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3组中,ACI以第Ⅱ组(173.95)为最高,第Ⅳ组次之,2组均判为中等效果。第Ⅲ组ACI为117.55,小于120判为无效。蒜瓣浸出液对体外抑杀未孢子化卵囊感染、体内阻断球虫发育效果较好。

教育期刊网 http://www.jyqkw.com
关键词 :蒜瓣;抗柔嫩艾美耳球虫;效果

中图分类号:S852.72+3文献标识码:A文章编号:0439-8114(2015)01-0134-03

DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.01.035

Effects of Garlic Lixivium on Anti-E.tenella Coccidia

LIU Li-heng,LUO Feng,WU Jia-bin

(College of Animal Science and Technology, Jiangxi Agriculture University, Nanchang 330045,China)

Abstract: Five groups were set to investigate the clinical application of garlic lixivium in anti-E.tenella Coccidia. The oocysts in group I were put in 50%,20%,10% garlic lixivium with 2.5% potassium dichromate solution, and incubated in constant temperature for 24,48, and 72 hours to calculate sporulated oocysts. In group II and III, the un-sporulated oocysts and sporulated oocysts were incubated in constant temperature for 48 hours after killed by the 50% garlic lixivium, and then adopted 1×105 oocysts to infect chickens. In group IV,the chicken were infected with 1×105 sporulated oocysts and treated with 20% garlic lixivium instead of drinking water. In group V, the chicken were infected with 1×105 sporulated oocysts without any repellent or herbs. The group VI was control group with no infection and no repellent or herbs supplied. The results showed that the sporulated rate of oocysts treated with 50%, 20% garlic lixivium and incubated 24 h, 48 h, 72 h were significantly different from the control group(P<0.05). The average weight gain of the chicken in group II were relatively higher and showed significant difference with group V(P<0.05). The average OPG number of the chickens in group III were only lower than that of group V, and significantly higher than that of group II and IV. The oocysts ratio of group II and IV was from 25% to 50%, with the oocysts value of 10. The oocysts ration of group III was between 75% to 100%, with the oocysts value of 40. There only part of chickens in group III and IV were observed bloody stool with not seriousness. The lesions value of group III was 11.7, only lower than group V (23.3) and significantly different with group IV. The ACI number in group II was 173.95 and followed by group IV. Both two treatments were judged as moderate effect. The ACI of group III was 117.5, and judged as invalid effect with the number below 120. It is indicated that the garlic lixivium was benefit to in vitro inhibition of un-sporulated oocysts infection and intro restraining of coccidian growth.

Key words: Garlic clove; Anti-E.tenella; effect

收稿日期:2014-05-29

基金项目:江西农业大学校自然科学基金项目(09003307)

作者简介:刘立恒(1974-),男,河北沧州人,讲师,博士,主要从事动物寄生虫学研究,(电话)15879063651(电子信箱)lihengliu0714@163.com;

通信作者,吴家斌(1957-),男,高级实验师,主要从事动物寄生虫学研究,(电话)15970478732(电子信箱)okwjb-123@163.com。

随着养鸡业的不断发展,抗鸡球虫病的药物效果、药物抗药性、药物残留或鸡产品食用安全越来越受到关注[1,2]。中草药具有抑杀球虫和毒副作用小、增强机体免疫功能及促生长等优点,尤其是鸡球虫对其不易产生耐药性,有着广阔的前景[3]。刘星等[4]用20种中草药体外抑杀兔肠球虫及肝球虫卵囊,结果表明,侧柏叶、白头翁、大蒜、农吉利、苦参、鱼腥草、洋葱、皂角和穿心莲等药物有较高的抑杀作用;李文超等[5]用白头翁汤复方及组分抑杀柔嫩艾美耳球虫卵囊,白头翁及其总皂苷对球虫卵囊的孢子化抑制效果较好。本研究用大蒜浸出液进行抗鸡球虫效果试验,以期为大蒜浸出液抗鸡球虫在临床应用方面提供依据。

1 材料与方法

1.1 虫株及动物

柔嫩艾美耳(E.tenella)虫株由本教研室提供;1日龄蛋鸡公雏购于南昌熊坊孵化场;干制蒜瓣购于农贸市场。

1.2 溶液的制备

饱和食盐水、2.5%重铬酸钾液:称取2 280 g食盐和2.5 g重铬酸钾,分别加入6 000 mL开水和100 mL清水中,溶解过滤。

蒜瓣浸出液:称取干制蒜瓣50 g加入100 mL清水,豆浆机打碎、过滤,取50、20、10 mL滤液,分别加50、80、90 mL蒸馏水,配制成50%、20%、10%的浸出液。

1.3 虫株复壮、增殖

取E.tenella虫株卵囊液,对水离心2遍洗去重铬酸钾液,经口感染公雏,6 d后检查粪便卵囊,当卵囊大量排出时,守候收集雏鸡刚排出的新鲜粪便于盛有适量4 ℃冷水的500 mL烧杯中,4 ℃冰箱保存。

1.4 卵囊分离收集

粪便加4 ℃冷水拌匀,过滤,2 000 r/min离心5 min,倾上清液留沉淀,加4 ℃ 10 mL饱和食盐水再2 000 r/min 离心5 min,留上清液弃沉淀物,加冷水离心,倾上清液留沉淀液,重复2~3遍。

1.5 试验分组

试验设体外抑杀未孢子化卵囊发育组(Ⅰ组)、体外抑杀未孢子化卵囊感染组(Ⅱ组)、体外抑杀孢子化卵囊感染组(Ⅲ组)、体内阻断球虫发育组(Ⅳ组)、感染对照组(Ⅴ组)、空白对照组(Ⅵ组)。第Ⅰ组:卵囊分别投入50%、20%、10%的蒜瓣浸出液、2.5%重铬酸钾液中,每份3个重复,恒温培养24、48、72 h后计算卵囊孢子化率。第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组,雏鸡10日龄时随机分组(6只/组),饲养于消毒后的不锈钢笼内,食用不含药物或鸡球虫污染的饲料和水。25日龄时空腹称重,第Ⅱ、Ⅲ组:分别以50%蒜瓣浸出液抑杀的未孢子化、孢子化卵囊,恒温培养48 h后洗净感染1×105个/只卵囊;第Ⅳ组:感染1×105个/只孢子化卵囊,以20%的蒜瓣浸出液作为驱虫中药替代饮水;第Ⅴ组:感染1×105个/只孢子化卵囊后不给药;第Ⅵ组:不感染不给药。分组后每天观察雏鸡的精神、饮食和粪便状况,记录发病鸡或死亡雏鸡数,对死亡雏鸡解剖确定是否死于球虫病;感染第5天起,每天检查收集Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组雏鸡粪便,统计血便堆数,计算OPG;感染后第八天各组雏鸡空腹称重并剖检,观察鸡只盲肠病变并给分。

1.6 卵囊的计算

1.6.1 卵囊孢子化率 卵囊培养24、48、72 h时,吸管取1滴于载玻片中央,加盖玻片在显微镜下逐行随机计算未孢子化卵囊及孢子化卵囊100以上个数,重复计数3次,分别记录每次孢子化卵囊与未孢子化卵囊的数据。用Excel软件统计每个样品中孢子化卵囊平均百分率、标准差及t检验的差异水平。

1.6.2 卵囊定量感染 用刻度吸管移取孢子化卵囊液1 mL于青霉素空瓶内,使10 μL卵囊液中卵囊数在40~100个为好。用10 μL移液器吸卵囊液于载玻片上,覆盖玻片在160倍显微镜下逐行计数,以重复计数3次的平均值,推算稀释后体积内的卵囊总数,也就是1 mL原液内的卵囊数。根据试验攻虫数(1×105个/只),确定卵囊原液体积。

1.7 抗球虫效果判断标准

根据各组相对增重率、血便记分、存活率、病变值、卵囊值与抗球虫指数(ACI)综合评价。

1.7.1 相对增重率 相对增重率=(感染各组雏鸡平均增重/不感染不给药组鸡平均增重)×100%。

1.7.2 血便记分 感染第5、6、7天参考 Morehouse[6]的方法,按以下标准记分:正常0分;少量血便1分;中等量血便2分;许多血便3分;无正常粪便4分。0分不作记录次数计。平均粪便记分=每组鸡粪便记分之和/记录次数。

1.7.3 鸡粪便OPG 参照斯陶尔氏法(Stoll’s method)[7]计算OPG。

1.7.4 存活率 存活率=(组内鸡存活数/组内鸡总数)×100%。

1.7.5 病变值 病变值=每组平均病变记分×10,病变记分按Johnson等[8]的方法给盲肠病变记分。摘取盲肠,盲肠两侧病变不一致时,以严重的一侧为准。盲肠正常并且无肉眼病变,记0分;盲肠壁有很少量散在淤血点,但肠壁不增厚,内容物正常记1分;盲肠壁增厚,盲肠内容物明显带血,病变数量较多,记2分;盲肠内容物多量带血或有盲肠芯,盲肠壁肥厚明显,记3分;盲肠因充满大量血液或肠芯而明显肿大,外观呈酱色,记4分。死于球虫病鸡只记4分。

1.7.6 卵囊值 取感染后第5~7天雏鸡粪便每克粪便中的卵囊数(OPG)的平均值与感染对照组雏鸡OPG值的比值。并按角田清[9]标准,比值小于1%,卵囊值为0;在1%~25%时,卵囊值为5;在25%~50%时,卵囊值为10;在50%~75%时,卵囊值为20;在75%~100%时,卵囊值为40。

1.7.7 抗球虫指数 按文献[7]计算(ACI):ACI=(存活率+相对增重率)-(病变值+卵囊值+血便计分);判定标准:ACI≥180判为高效,160~179判为中效,120~159判为低效,<120判为无效。

2 结果与分析

2.1 蒜瓣浸出液对E.tenella卵囊孢子化率的影响

由表1可知,E.tenellag球虫卵囊随蒜瓣浸出液浓度降低和时间的延长,孢子化率呈上升趋势;50%、20%浓度蒜瓣浸出液于24、48、72 h与对照组差异均显著(P<0.05),10%浓度蒜瓣浸出液于24、48、72 h与对照组差异均不显著(表1)。

2.2 蒜瓣浸出液抗E.tenella球虫效果

抗球虫效果判断标准是根据各组相对增重率、血便记分、存活率、病变值、卵囊值与抗球虫指数 (ACI)综合评价(表2)。

2.2.1 临床及剖解情况 空白对照组(第Ⅵ组)雏鸡精神、食欲、粪便均正常。感染对照组(第Ⅴ组)及各试验组的雏鸡均有不同数量、不同程度表现精神沉郁、采食量减少或食欲废绝、羽毛散乱、畏寒等症状,第5~7天,第Ⅲ、Ⅴ组部分雏鸡出现血便。病变主要局限于盲肠,盲肠肿胀并有凝血块及充满干酪样物质,盲肠硬化并脆弱;盲肠明显萎缩,其长度等于或短于直肠,内容物少,整个盲肠 呈粉红色。

2.2.2 增重与相对增重率 在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组中,以第Ⅱ组雏鸡的平均增重及相对增重率最高,组间差异不显著,与感染对照组(第Ⅴ组)差异显著。

2.2.3 卵囊比值与卵囊值 第Ⅲ组平均OPG数仅次于感染对照组(第Ⅴ组),远高于Ⅱ、Ⅳ组,差异显著;第Ⅱ、Ⅳ组卵囊比值在25%~50%区间,卵囊值均为10;第Ⅲ组卵囊比值在75%~100%区间,卵囊值为40。

2.2.4 血便、病变记分与病变值 第Ⅲ、Ⅴ组部分鸡只出现血便;第Ⅲ组病变值(11.7)仅次于第Ⅴ组(23.3),第Ⅲ、Ⅳ组间差异显著。

2.2.5 抗球虫指数(ACI) 在第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ3组中,ACI以第Ⅱ组(173.95)为最高,第Ⅳ组次之,2组均判为中等效果。第Ⅲ组ACI为117.55,小于120判为无效。

3 小结与讨论

3.1 蒜瓣浸出液对卵囊的影响

试验以蒜瓣浸出液抑杀未孢子化卵囊,了解卵囊的孢子化率情况;通过蒜瓣浸出液抑杀未孢子化、孢子化卵囊后感染雏鸡和直接感染卵囊后口服蒜瓣浸出液,与感染对照组、空白对照组比较,掌握蒜瓣浸出液的抗球虫指数(ACI)。

3.1.1 体外影响 大蒜素是大蒜的主要活性成分,具有良好的药用价值。大蒜素具有广泛的药理活性, 抗菌谱广,对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌都具有较好的抑制作用[10]。结果表明,蒜瓣浸出液也具有良好的抑杀柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊作用;抑杀未孢子化卵囊后感染雏鸡,相对增重值较高、卵囊比值最低,抗球虫指数(173.95)为中等效果;对孢子化卵囊抑杀效果不佳。

3.1.2 体内影响 感染卵囊后口服20%的蒜瓣浸出液,作为一种中草药驱虫,卵囊比值最低,抗球虫指数(161.90)为中等效果。但蒜瓣浸出液含有大蒜素,味辣,适口性极差,容易引起鸡体缺水,影响采食和增重。降低蒜瓣浸出液浓度适当可以改善适口性、增重等,但是否造成抗球虫指数下降而为低效或无效,有待进一步研究。

3.2 虫株对ACI的影响

柔嫩艾美耳球虫是鸡的艾美耳球虫中致病性最强的一种,它主要危害15~45日龄雏鸡,本试验感染对照组的结果表明:ACI值为91.7、血便情况不严重、没有死亡雏鸡,说明试验使用的柔嫩艾美耳球虫虫株的毒力不够强(试验采用了经多次复制传代、早熟为多的虫株,毒力不太强),还是选择从野毒株中分离出的柔嫩艾美耳球虫虫株试验为好。

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参考文献:

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(责任编辑 程碧军)

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