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原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达分析

朱昭颖

梧州市妇幼保健院妇产科,广西梧州 543002

[摘要] 目的 分析原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达。 方法 选取该院2012年10月—2013年10月间收治的20例原发性羊水过多产妇设为观察组,所有产妇均为剖宫产,另选同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇20例为对照组。对两组产妇的胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达进行分析对比。结果 观察组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为(0.77±0.14)、(0.85±0.16)、(0.57±0.09),对照组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为(0.40±0.06)、(0.35±0.10)、(0.46±0.08),两组数据结果比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为[(0.194±0.025、(0.192±0.025、(0.169 ±0.027)],对照组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为[(0.149±0.017、(0.151±0.022、(0.155±0.024)],两组产妇羊膜、胎盘组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 通道蛋白8在产妇羊水量的调节中发挥重要作用。

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关键词 原发性羊水过多;产妇;胎膜;胎盘;水通道蛋白8;表达

[中图分类号] R714.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742(2014)05(a)-0189-02

[作者简介] 朱昭颖(1971-),女,广东兴宁人,本科,妇产科主治医师,主要从事孕期保健与优生遗传工作。

正常情况下,羊水的产生和吸收保持动态平衡,为胎儿运动、生长和发育提供必需的内环境。而这种动态平衡往往会因为各种因素打破,从而引起羊水量发生异常,大大提高了围产儿发病率和死亡率。临床表明,水通道蛋白8在母胎液和羊水平衡的调节中发挥了重要的作用[1-4]。为进一步分析原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达,该研究选取该院2012年10月—2013年10月间收治的20例原发性羊水过多产妇和同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇进行对比分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院收治的20名原发性羊水过多产妇设为观察组,所有产妇均为剖宫产,另选同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇设为对照组。所有产妇经产前检查显示各项体征正常,无胎儿畸形、胎膜早破、糖尿病及其他妊娠并发症。观察组中最大年龄为37岁,最小年龄为18岁,平均年龄(25.36±5.63)岁,最长孕周为42周,最短为37周,初产妇12例,经产妇8例;对照组中最大年龄为36岁,最小年龄为19岁,平均年龄(24.57±5.47)岁,最长孕周为42周,最短为37周,初产妇11例,经产妇9例。

1.2 方法

在产妇分娩之后立即取胎膜和胎盘组织标本各2份,采用无菌生理盐水将所取标本漂洗干净,同时将血液尽可能的去除干净。将其中一份标本分离出羊膜、绒毛膜和胎盘组织后置于液氮,另外一份则放置于浓度为4%的多聚甲醛中固定24 h后行石蜡包埋。水通道蛋白8 mRNA表达水平检测采用RT—PCR技术。具体检测步骤为:将预先准备的胎盘及胎膜组织取适量放置于液氮中研磨成粉末,采用由美国Invitrogen公司生产的TRlzol试剂提取总RNA。采用由日本TaKaRa公司生产的RNA PCR试剂盒按照操作规范提取总RNA并逆转录为cDNA,同时进行PCR扩增。PCR反应体系50ul,反应条件为:94℃预变性3 min一个循环;再94℃变性35 s,57℃退火40 s,72℃延伸45 s,共30个循环;最后72℃延伸6 min。PCR产物行1.5%琼脂糖凝胶电泳,在凝胶成像系统上成像并保存结果。采用Quantity One图像分析系统值分析电泳结果,同时对AQP8产物与B—actin产物的A值的比值进行计算,将计算值作为水通道蛋白8 mRNA的相对表达水平。

水通道蛋白8蛋白表达水平检测采用免疫组化技术。具体步骤为:预先将准备的标本通过浓度为4%的多聚甲醛固定一整天后实施石蜡包埋,切成5 μm的薄片备用。将石蜡切片进行脱蜡和水化处理,然后放进0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液(pH值6.0)中微波修复10~15 min;采用浓度为3%的H2O2去离子水处理10 min,将内源性过氧化物酶活性消除感觉,再按照标准操作规范进行封闭、稀释及显色,最后采用北航CM-2000B型生物医学图像分析系统对免疫组化图片进行分析。在×400的高倍视野下,每张切片随机选取5个视野,测量阳性表达部位的平均A值,以其均值表示AQP8蛋白的相对表达水平。

1.3 统计方法

将该次统计调查的实验数据均录入spss17.0软件包进行统计学分析,计量资料以均数±标准差(x±s)表示,进行t检验。

2 结果

观察组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为(0.77±0.14)、(0.85±0.16)、(0.57±0.09),对照组产妇中羊膜、胎盘、绒毛膜组织的水通道蛋白8 mRNA表达水平分别为(0.40±0.06)、(0.35±0.10)、(0.46±0.08),两组数据结果比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为(0.194±0.025)、(0.192±0.025)、(0.169 ±0.027),对照组产妇羊膜、胎盘、绒毛膜和组织中的水通道蛋白8蛋白表达水平分别为(0.149±0.017)、(0.151±0.022)、(0.155±0.024),两组产妇羊膜、胎盘组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异有统计学意义(P<0.05),而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较有统计学意义差异(P>0.05)。见表1。

3 讨论

据有关临床统计资料表明,羊水的膜内吸收是羊水量调节的重要渠道[5]。目前,大量研究证实,羊水的膜内吸收是羊水量调节的关键途径口。向胎羊血管缓慢注射生理盐水后,胎羊尿液每天可增加4 L,与此同时,羊水的膜内吸收显著增加,从而避免了水过多的发生。我国著名医学研究者黄锦[6]等研究表明,在人和其他动物胎膜及胎盘组织中,AQPl、AQP3、AQP8、AQP9均有表达。其中,AQPl mRNA表现为显著增多,AQP3和AQP9对于水分子具有良好的通透性,除此之外,对尿素和甘油也具有一定的通透性,有研究者提出可能参与了尿素的转运;同时,Koyama[7-10]等通过对非洲爪蟾蜍卵母细胞转染人AQP8基因试验发现,AQP8对水分子具有良好的通透性。我国在上世纪初的时候便有临床试验证实AQP8 mRNA在人羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞、绒毛膜上皮细胞和中均有表达。由此给于我们提示AQP8可能参与了羊水量的调节。

该研究主要采用分组对照的形式,对该院2012年10月—2013年10月间收治的20名原发性羊水过多产妇和同期的20例因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇进行了研究分析,通过研究结果可以看出,通过RT·PCR技术可检测到羊水过多患者以及正常孕妇及的羊膜、胎盘、绒毛膜中均有水通道蛋白8 mRNA表达,与国内相关文献报道相符合。通过免疫组化法检测结果可以发现,水通道蛋白8蛋白主要表达于羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞、绒毛膜滋养细胞和。观察组产妇水通道蛋白8 mRNA在羊膜、胎盘、绒毛膜组织中的相对表达水平均明显高于对照组;另外,观察组产妇水通道蛋白8胎盘蛋白在羊膜和胎盘组织中的相对表达水平也较对照组明显增加;而绒毛膜组织中水通道蛋白8蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。分析其原因可能是由于水通道蛋白8 mRNA增加的幅度较小等因素引起。同时,通过该次研究发现,当产妇的羊水量过多的时候,羊膜组织水通道蛋白8 mRNA和蛋白的表达上调,它可能会引起羊膜增加,从而增加了对水的通透性,最终促进了羊水的膜内吸收,当水分吸收量增大时,就会使胎盘组织中水通道蛋白8 mRNA和蛋白表达上调,从而促进了母胎间经胎盘的水转运过程,有利于排出胎儿体内过多的水分。由此给于我们提示,水通道蛋白8在羊水量的调节中可能发挥代偿作用,根据这一思路可进行深一步的羊水量异常治疗研究。

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参考文献

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[9] 熊正方, 刘慧姝, 郝荣增. 水通道蛋白3、8、9 mRNA在人羊水过少胎盘组织中的表达[J]. 中华生物医学工程杂志, 2010(2): 155-158.

[10] 朱宇, 陈盛强, 杨艳娟, 等. 水通道蛋白8在人胎膜中的表达[J]. 临床医学, 2010(6): 34-35.

(收稿日期:2014-01-14)

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